Kontaminering av cellekulturer kan lett bli det vanligste problemet i cellekulturlaboratorier, og noen ganger forårsake svært alvorlige konsekvenser.Cellekulturforurensninger kan deles inn i to kategorier, kjemiske forurensninger som medium, serum og vannforurensninger, endotoksiner, myknere og vaskemidler, og biologiske forurensninger som bakterier, muggsopp, gjær, virus, mykoplasmas kryssinfeksjon.Forurenset av andre cellelinjer.Selv om det er umulig å eliminere forurensning fullstendig, kan frekvensen og alvorlighetsgraden reduseres ved å forstå kilden grundig og følge gode aseptiske teknikker
1. Denne delen skisserer hovedtypene av biologisk forurensning:
Bakteriell forurensning
Mugg- og virusforurensning
Mycoplasma forurensning
Gjærforurensning
1.1 Bakteriell forurensning
Bakterier er en stor gruppe allestedsnærværende encellede mikroorganismer.De er vanligvis bare noen få mikron i diameter og kan komme i en rekke former, fra kuler til stenger og spiraler.På grunn av deres allestedsnærvær, størrelse og raske veksthastighet, er bakterier, sammen med gjær og muggsopp, de vanligste biologiske forurensningene i cellekultur.
1.1.1 Påvisning av bakteriell kontaminering
Bakteriell kontaminering oppdages lett ved visuell inspeksjon av kulturen innen få dager etter at den har blitt infisert;
Infiserte kulturer virker vanligvis uklare (dvs. grumsete), noen ganger med en tynn film på overflaten.
Plutselige fall i dyrkingsmediets pH-verdi opptrer også ofte.
Under et laveffektmikroskop fremstår bakteriene som små, bevegelige granuler mellom cellene, og observasjon under et høyeffektmikroskop kan løse formene til individuelle bakterier.
1.2Mugg- og virusforurensning
1.2.1 Muggforurensning
Muggsopp er eukaryote mikroorganismer fra soppriket som vokser i form av flercellede filamenter kalt hyfer.Forbindelsesnettverkene til disse flercellede filamentene inneholder genetisk identiske kjerner kalt kolonier eller mycel.
I likhet med gjærforurensning forblir pH i kulturen stabil under den innledende fasen av forurensning og øker deretter raskt når kulturen blir mer alvorlig infisert og blir uklar.Under mikroskopet er mycelet vanligvis filamentøst, noen ganger som tette klynger av sporer.Sporene til mange muggsopp kan overleve i ekstremt tøffe og ugjestmilde miljøer under hvilefasen, og aktiveres bare når de rette vekstforholdene møtes.
1.2.2 Viruskontaminering
Virus er mikroskopiske smittestoffer som tar over vertscellens maskineri for reproduksjon.Deres ekstremt lille størrelse gjør dem vanskelige å oppdage i kultur og å fjerne fra reagenser som brukes i cellekulturlaboratorier.Siden de fleste virus har svært strenge krav til verten, påvirker de vanligvis ikke cellekulturer av andre arter enn verten negativt.
Imidlertid kan bruk av virusinfiserte cellekulturer utgjøre en alvorlig risiko for helsen til laboratoriepersonell, spesielt hvis menneske- eller primatceller dyrkes i laboratoriet.
Virusinfeksjon i cellekulturer kan påvises ved elektronmikroskopi, immunfarging med et sett antistoffer, ELISA eller PCR med passende virale primere.
1.3 Mykoplasmaforurensning
Mykoplasma er enkle bakterier uten cellevegger, og de antas å være de minste selvreplikerende organismer.På grunn av deres ekstremt lille størrelse (vanligvis mindre enn 1 mikron), er mykoplasma vanskelig å oppdage før de når ekstremt høye tettheter og får cellekulturer til å forringes;Inntil da er det vanligvis ingen åpenbare tegn på infeksjon.
1.3.1 Påvisning av mykoplasmaforurensning
Noen saktevoksende mykoplasmer kan vedvare i kulturer uten å forårsake celledød, men de endrer oppførselen og metabolismen til vertsceller i kulturer.
Kronisk mykoplasmainfeksjon kan karakteriseres av redusert celleproliferasjonshastighet, redusert metningstetthet og agglutinasjon i suspensjonskultur.
Den eneste pålitelige måten å oppdage mykoplasmakontaminering på er imidlertid å teste kulturen regelmessig ved bruk av fluorescerende farging (f.eks. Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunfarging, autoradiografi eller mikrobiell testing.
1.4 Gjærforurensning
Gjær er encellede eukaryoter av soppriket, i størrelse fra noen få mikron (vanligvis) til 40 mikron (sjelden).
1.4.1 Påvisning av gjærforurensning
Som med bakteriell forurensning, kan kulturer forurenset med gjær bli uklare, spesielt hvis forurensningen er i et avansert stadium.pH-verdien til kulturer som er forurenset med gjær endres svært lite før forurensningen blir mer alvorlig, på hvilket stadium pH-en vanligvis øker.Under mikroskopet fremstår gjær som individuelle eggformede eller sfæriske partikler og kan produsere mindre partikler.
2. Kryssinfeksjon
Selv om det ikke er så vanlig som mikrobiell forurensning, er omfattende krysskontaminering av mange cellelinjer med HeLa og andre hurtigvoksende cellelinjer et klart definert problem med alvorlige konsekvenser.Skaff cellelinjer fra anerkjente cellebanker, kontroller regelmessig egenskapene til cellelinjene og bruk gode aseptiske teknikker.Disse fremgangsmåtene vil hjelpe deg å unngå krysskontaminering.DNA-fingeravtrykk, karyotyping og isotyping kan bekrefte om det er krysskontaminering i cellekulturen din.
Selv om det ikke er så vanlig som mikrobiell forurensning, er omfattende krysskontaminering av mange cellelinjer med HeLa og andre hurtigvoksende cellelinjer et klart definert problem med alvorlige konsekvenser.Skaff cellelinjer fra anerkjente cellebanker, kontroller regelmessig egenskapene til cellelinjene og bruk gode aseptiske teknikker.Disse fremgangsmåtene vil hjelpe deg å unngå krysskontaminering.DNA-fingeravtrykk, karyotyping og isotyping kan bekrefte om det er krysskontaminering i cellekulturen din.
Innleggstid: Feb-01-2023